TetO-FUW-Oct4质粒的构建及在HUVEC的表达

【摘要】目的：构建可调控Oct4慢病毒表达载体（TetO-FUW-Oct4）,并将其转导人脐静脉内皮细胞（HUVEC），建立受强力霉素（Doxycycline，Dox）调控表达Oct4的HUVEC细胞系；对Dox诱导Oct4表达的剂量-效应（Dose-effect）及时间-反应（Time-response）关系进行详细分析，明确诱导表达方案。方法：应用PCR技术以含有Oct4全长cDNA的质粒为模板，含有EcoRI酶切位点的引物扩增编码Oct4全长的cDNA片段，经EcoRI酶切后插入Tet-On调控的慢病毒表达载体（TetO-FUW）的EcoRI酶切位点，使其表达严格受Tet-On启动子调控。通过重组质粒酶切及DNA测序分析来确定所构建质粒的正确性。构建的质粒（TetO-FUW-Oct4）经293T细胞包装转导至HUVEC细胞，给予转导后的HUVEC不同剂量的Dox和不同的诱导时间，利用实时定量PCR法分析Oct4的表达规律，分析Dox诱导Oct4表达的剂量-效应及时间-反应关系。结果：①成功构建TetO-FUW-Oct4可调控慢病毒载体。②成功建立受Dox调控的HUVECTetO-FUW-Oct4细胞系。③分析了Dox诱导Oct4表达的剂量-效应及时间-反应关系，确定最佳诱导方案。结论：成功构建TetO-FUW-Oct4可调控慢病毒载体，并且利用慢病毒技术建立了受Dox调控的HUVECTetO-FUW-Oct4细胞系，为HUVEC的重编程提供实验模型。通过对Dox诱导Oct4表达的剂量-效应及时间-反应关系的分析，明确其诱导表达方案，为对Oct4功能的深入研究提供技术支持。
【作者】李文雪；
【导师】苏学今；李荣贵；
【作者基本信息】吉林大学，病理学与病理生理学，2014，硕士
【关键词】Oct4；强力霉素；人脐静脉内皮细胞；Tet-On系统；

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